Wir verwenden Cookies, um Ihr Erlebnis zu verbessern.Indem Sie weiter auf dieser Website surfen, stimmen Sie unserer Verwendung von Cookies zu.Mehr Info.In einer kürzlich in PLoS Pathogens veröffentlichten Studie untersuchten Forscher die Auswirkungen des offenen Leserahmens (ORF)-6 des schweren akuten respiratorischen Syndroms Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) auf die Signalübertragung des angeborenen Immunsystems.Ein Betacoronavirus namens SARS-CoV-2 ist die Ursache der tödlichen Viruserkrankung Coronavirus Disease 2019 (COVID-19).Das Verständnis der Molekularbiologie des Virus und seiner Interaktion mit der Wirtszelle ist aufgrund seiner erheblichen Auswirkungen auf die menschliche Gesundheit dringend erforderlich.Neun mutmaßliche akzessorische Proteine, die SARS-CoV-2 kodiert, gelten als unnötig für die In-vitro-Replikation und spielen wahrscheinlich eine Rolle bei der Modifikation des Wirtszellmilieus, um die Virusreplikation zu fördern.In der vorliegenden Studie zeigten die Forscher, dass das akzessorische SARS-CoV-2-ORF6-Protein mit dem zellulären Ribonukleinsäure-Export 1 (Rae1) interagierte, indem es den Export von Boten-Ribonukleinsäure (mRNA) verhinderte.Das Team erstellte zunächst ein Panel der virusähnlichen Partikel (VLPs) des Human Immunodeficiency Virus (HIV)-1, die jeden ORF kodierten, um eine Vielzahl verschiedener Zelllinien zu transduzieren und die Expression jedes akzessorischen Proteins separat zu induzieren, um die Funktion von SARS zu untersuchen -CoV-2 akzessorische Proteine.VLPs wurden erzeugt, als HEK293T-Zellen mit HIV-1 Gag-Pol, VSV-G und einem pLVX-StrepII-ORF-Vektor, der ORF3a-, ORF3d-, ORF6-, ORF7a-, ORF7b-, ORF8-, ORF9b-, ORF9c- oder ORF10-Gene enthielt, cotransfiziert wurden.Alle VLPs hatten mindestens 104 infektiöse Einheiten/ml, als ihre Titer nach 72 Stunden bestimmt wurden, mit Ausnahme des ORF6, der für ein VLP mit nicht nachweisbaren infektiösen Einheiten kodiert.Transfizierte HEK293T-Zelllysate wurden durch Immunoblot des HIV-1-Strukturpolyproteins Gag untersucht, um festzustellen, ob dies durch einen Abfall der Infektiosität oder eine Verringerung der Partikelbildung verursacht wurde.Das Team produzierte dann grün fluoreszierende Protein (GFP)-Reporter-HIV-1-VLPs, während es die Konzentrationen von ORF6 oder ORF9b als Kontrolle erhöhte, um festzustellen, ob es einen dosisabhängigen Einfluss auf die Gag-Expression und die VLP-Erzeugung gab.Immunoblotting wurde verwendet, um HIV-1 Gag und ORF6/ORF9b in transfizierten HEK293T-Zelllysaten zu untersuchen.Die Forscher untersuchten auch die Wirkung von ORF6 auf die Expression von MLV-Gag und mApple-Fluoreszenzprotein, da sie völlig andere Proteinsequenzen als HIV-1-Gag aufweisen, um festzustellen, ob die ORF6-Unterdrückung nur für die HIV-1-Gag-Expression spezifisch war.Ähnlich wie bei HIV-1-Gag wurden die MLV-Gag-Expression und die VLP-Erzeugung durch ORF6 dosisabhängig unterdrückt.Die Studie überexprimierte Rae1 auch zusammen mit HIV-1 Gag und ORF6 in HEK293T-Zellen, um die Hypothese zu testen, dass ORF6 die Proteinexpression durch Wechselwirkung mit dem Rae1-Nup98-Komplex hemmen könnte.Um die Proteinspiegel von ORF6 mit den Rael-Spiegeln konsistent zu halten, verwendete die Studie in diesem Fall den ursprünglichen ORF6-Expressionsvektor.Co-Immunpräzipitationen wurden durchgeführt, um die Verbindung von ORF6 mit Rae1 zu verifizieren und die Beziehung zu Nup98 zu untersuchen.Plasmide, die Strep-markiertes GFP oder ORF6 mit Nup98 und/oder HA-Rae1 codieren, wurden in HEK293T-Zellen co-transfiziert.Die Zellen wurden nach 24 Stunden lysiert und ein Anti-Strep-Antikörper wurde zur Immunpräzipitation von GFP oder ORF6 verwendet.Alle Zellen, außer denen, die mit pLVX-StrepII-ORF6 transfiziert waren, zeigten Anzeichen von Gag.Dies deutete darauf hin, dass die ORF6-Expression die Erzeugung von VLPs verhinderte, indem sie die Synthese von Gag hemmte.Erst wenn ORF6 in steigenden Konzentrationen vorhanden war, nahm die gag-Expression dosisabhängig ab.Das Team bestätigte, dass ORF6, das von diesem Vektor produziert wurde, die virale Infektiosität und die Gag-Expression signifikant reduzierte.Obwohl das Immunoblot eine sehr geringe Expression von ORF3d, ORF9c und ORF10 zeigte, was auch andere gesehen haben, hatte keiner der anderen ORFs einen Einfluss auf die mittlere Fluoreszenzintensität (MFI) von mApple.Insgesamt implizieren unsere Ergebnisse, dass ORF6 die Produktion mehrerer Proteine blockieren kann, die von einem Vektor produziert werden.Das Team bestätigte auch, dass ORF6, das von diesem Vektor produziert wurde, die virale Infektiosität und die Gag-Expression signifikant reduzierte.Als der MFI von mApple durch Durchflusszytometrie nach Kotransfektion von HEK293T-Zellen mit Plasmiden, die jeden SARS-CoV-2-ORF im Twin-Strep-markierten Vektor exprimierten, bewertet wurde, verringerte ORF6 den MFI im Vergleich zur Kontrolle signifikant.Obwohl Immunblotting eine sehr geringe Expression von ORF3d, ORF9c und ORF10 zeigte, was auch andere gesehen haben, hatte keiner der anderen ORFs einen Einfluss auf die MFI von mApple.Zusammengenommen implizieren unsere Ergebnisse, dass ORF6 die Produktion mehrerer Proteine blockieren kann, die von einem Vektor produziert werden.Mit Leptomycin B (LMB) behandelte Zellen wiesen im Vergleich zu unbehandelten Zellen auch ein größeres Nucl:Cyto-GFP-mRNA-Verhältnis von 0,93 bzw. 0,35 auf, obwohl die Gesamt-GFP-RNA-Spiegel verringert waren.Zellen, die ORF6 exprimieren, hatten insbesondere ein ähnliches Nucl:Cyto-GFP-mRNA-Verhältnis wie die ORF9b-exprimierenden Kontrollzellen, was die nur geringfügige Verringerung der GFP-Expression widerspiegelt, während Zellen, die ORF6 (LMB) exprimieren, das Verhältnis von Nucl:Cyto-GFP-mRNA erhöhten und die GFP-Expression verringerten.Insgesamt deuten Hinweise darauf hin, dass ORF6 den Rae1-abhängigen Kernexport von GFP-mRNA blockiert.Insgesamt enthüllten die Studienergebnisse einen neuartigen Mechanismus, den SARS-CoV-2 verwendet, um die Umgebung der Wirtszelle zu manipulieren, um die antivirale Abwehr zu hemmen, was unser Wissen über die Taktik der viralen Reproduktion erweitert, die zu der beispiellosen globalen Gesundheitskatastrophe führte.Veröffentlicht in: Medizinische Wissenschaftsnachrichten |Nachrichten aus der medizinischen Forschung |Neuigkeiten zu Krankheiten/InfektionenTags: Antikörper, Zelle, Coronavirus, Coronavirus-Krankheit COVID-19, covid-19, Zytometrie, Durchflusszytometrie, Fluoreszenz, fluoreszierendes Protein, Gene, globale Gesundheit, HIV, HIV-1, Immunschwäche, in vitro, Molekularbiologie, Protein, Protein Expression, Reproduktion, Atemwege, Ribonukleinsäure, RNA, SARS, SARS-CoV-2, schweres akutes Atemwegssyndrom, schweres akutes Atemwegssyndrom, Syndrom, Transfektion, VirusBhavana Kunkalikar ist eine medizinische Autorin aus Goa, Indien.Ihr akademischer Hintergrund liegt in pharmazeutischen Wissenschaften und sie hat einen Bachelor-Abschluss in Pharmazie.Ihr Bildungshintergrund ermöglichte es ihr, ein Interesse an anatomischen und physiologischen Wissenschaften zu fördern.Ihre College-Projektarbeit zum Thema „Die Manifestationen und Ursachen der Sichelzellenanämie“ bildete das Sprungbrett zu einer lebenslangen Faszination für die menschliche Pathophysiologie.Bitte verwenden Sie eines der folgenden Formate, um diesen Artikel in Ihrem Essay, Ihrer Arbeit oder Ihrem Bericht zu zitieren:Kunkalikar, Bhavana.(2022, 30. August).Neuartiger Mechanismus identifiziert, den SARS-CoV-2 verwendet, um antivirale Reaktionen zu unterdrücken, um die Zelle für Infektionen toleranter zu machen.News-Medical.Abgerufen am 02. September 2022 von https://www.news-medical.net/news/20220830/Novel-mechanism-identified-that-SARS-CoV-2-uses-to-suppress-antiviral-responses-to-make -the-cell-more-permissive-to-infection.aspx.Kunkalikar, Bhavana."Neuartiger Mechanismus identifiziert, den SARS-CoV-2 verwendet, um antivirale Reaktionen zu unterdrücken, um die Zelle für Infektionen toleranter zu machen".News-Medical.02. September 2022.